金葡萄球菌A蛋白（Staphylococcal Protein A、簡稱SPA）是細(xì)胞壁抗原的主要成分，幾乎90%以上的菌株均含有這種成分，但不同的菌株含量差別十分懸殊。SPA占整個(gè)細(xì)胞壁蛋白成分的6.7%，通過胞壁肽聚糖以共價(jià)鍵與之結(jié)合。其它葡萄球菌如表皮葡萄球菌、腐生葡萄球菌不含SPA。
SPA的理化性質(zhì)
SPA是一種蛋白質(zhì),由亮、纈、脯、丙、蘇、甘、絲、谷丙、天門冬及賴氨酸等十種氨基酸組成。由于不含有胱氨酸及半胱氨酸，所以無二硫鍵。紫外光譜和吸收系數(shù)為A275nm %=1.65，等電點(diǎn)為pH5.1。SPA十分穩(wěn)定，用4mol/L尿素、硫氰鹽酸、6mol/L的鹽酸胍和pH2.5的酸性條件，以及加熱煮沸均不影響其活性。其分子量因測定方法不同而有所差異。
SPA部分理化參數(shù)
分子量
42 000
沉降系數(shù)S 20w（ˊS ）
2.10
擴(kuò)散系數(shù)D20W（cm2/s）
4.3×10－7
Stocks半徑（nm）
5.00
摩擦比f/f,min
2.10
粘度（n） （ml/g）
2.90
Hμggins常數(shù)
0.66
比容V（ml/g）
0.72
SPA的免疫學(xué)性質(zhì)
SPA能與人及多種哺乳動(dòng)物血清IgG分子中的Fc片段結(jié)合，結(jié)合的親和性次序依次是豬、狗、兔、人、猴、鼠、小鼠及牛；對大白鼠、綿羊的親和力差；對馬、犢牛、山羊等無親和力；對所有的魚類、兩棲類、爬行類、鳥類（除少數(shù)例外）均不能與之結(jié)合。雞的IgG必須與相應(yīng)的抗原形成復(fù)合物才能與SPA結(jié)合，原因可能是Ag－Ab復(fù)合物改變了IgG的Fc片段的構(gòu)象。
SPA與IgG結(jié)合的亞類主要是IgG1、IgG2和IgG4。
SPA除與IgG結(jié)合外，還能與血清中少量的IgM和IgA結(jié)合，SPA菌對各類免疫球蛋白的吸附率：IgG為90%～98%，IgM為2%～30%，IgA為1.5%～20%。
出現(xiàn)共沉反應(yīng)的SPA與IgG必須有兩個(gè)結(jié)合部位，它們分別在Fc和Fab段上,缺一雖能與SPA結(jié)合，但不出現(xiàn)共沉反應(yīng)，這種Fab的參與并非SPA－抗體反應(yīng)?，F(xiàn)已研究表明，IgG與SPA的結(jié)合部位是CH2和CH3的交界處。
SPA的生物學(xué)特性
1．免疫原性與過敏原性 SPA做為免疫原能刺激免疫活性細(xì)胞合成Ig，又能與其相應(yīng)抗體的Fab段結(jié)合呈現(xiàn)抗原抗體的特異性反應(yīng)。SPA－IgG注射家兔皮下可引起Arthus樣反應(yīng)，還可引起豚鼠的遲發(fā)性超敏反應(yīng)。SPA體外試驗(yàn)，能刺激豚鼠離體回腸收縮。
2．抗吞噬作用 由于IgG的Fc段結(jié)合點(diǎn)既是lgG調(diào)理活性結(jié)合點(diǎn)，又是SPA反應(yīng)點(diǎn)。因此，SPA可與吞噬細(xì)胞競爭，結(jié)果抑制了多形核白細(xì)胞的吞噬作用，也可能是SPA阻斷調(diào)理素與吞噬細(xì)胞作用的結(jié)果。
3．固定補(bǔ)體 SPA－IgG和免疫復(fù)合物一樣可以固定人和某些動(dòng)物（如豚鼠、豬、狗等）血清中的補(bǔ)體，主要是通過補(bǔ)體傳統(tǒng)激活途徑。
4．促有絲分裂因子 SPA是一種B細(xì)胞激活劑，固相SPA作用明顯，并不需要T細(xì)胞輔助,可容性SPA作用微弱，必須有T細(xì)胞參與。
5．去封閉作用 固相SPA能部分去除腫瘤病人和帶瘤動(dòng)物血清中的封閉活性，從而降低了血清對淋巴細(xì)胞介導(dǎo)的細(xì)胞毒的封閉作用。
SPA的應(yīng)用
SPA應(yīng)用很廣，但所有應(yīng)用的原理都離不開SPA具有與IgG的Fc段的結(jié)合能力，主要應(yīng)用方面如下：
1．SPA菌的協(xié)同凝集作用
用已知的標(biāo)準(zhǔn)血清，吸附到SPA菌的表面,使之成為吸附抗體的載體,再以此去診斷相應(yīng)的未知抗原而產(chǎn)生肉眼可見的凝集顆粒,診斷的抗原可以是顆粒性的,也可以是可溶性的。此種凝集相當(dāng)于反向間接血凝,但省去間接血凝中的抗體純化,紅血球鞣化等復(fù)雜手續(xù),而只需要 SPA菌體及粗制免疫血清即可。所以此法簡單、快速,特異性敏感性均較滿意。目前已用于許多細(xì)胞和病毒的檢測及分型。
協(xié)同凝集只適用于檢測抗原，未見應(yīng)用于檢測抗體的報(bào)道。
2．作為廣譜第二抗體
用SPA代替抗體IgG的第二抗體，有如下優(yōu)點(diǎn)：
1.SPA制備容易，性質(zhì)穩(wěn)定，易純化，對人和多種哺乳動(dòng)物的IgG都能應(yīng)用,不受種屬限制。而第二抗體的制備比較麻煩，且需多次免疫動(dòng)物，在應(yīng)用上要受同種屬的限制
2.SPA的結(jié)合力強(qiáng)，相當(dāng)于游離抗體與抗原的結(jié)合力，對人和兔的親和常數(shù)均為103 L/克分子，結(jié)合后對IgG的活性無影響。無論在0℃、37℃、44℃及56℃幾乎均能立即結(jié)合而無需長時(shí)間的孵育，因此可以縮短試驗(yàn)時(shí)間，第二抗體在較長的孵育中，出現(xiàn)抗原分解的問題也可以得到解決
3.SPA容易標(biāo)上125 I、熒光素、辣根過氧化物酶、鐵蛋白等，因此可與多種技術(shù)相結(jié)合
4.在檢查細(xì)胞上的病毒抗原時(shí)，第二抗體往往特異性不強(qiáng)，會(huì)非特異性地與細(xì)胞膜上的Fc
上海通蔚生物科技有限公司
地址：上海市金山區(qū)楓涇鎮(zhèn)環(huán)東一路65弄2號(hào)3463室
主營產(chǎn)品：酶聯(lián)免疫試劑盒，食品農(nóng)殘檢測，細(xì)胞系，培養(yǎng)基，胎牛血清
©2019 版權(quán)所有：上海通蔚生物科技有限公司 備案號(hào)：滬ICP備14033764號(hào)-3 總訪問量：1320692 站點(diǎn)地圖 技術(shù)支持：環(huán)保在線 管理登陸